硫酸軟骨素的高效液相色譜測定法

本方法適用于保健食品中硫酸軟骨素的測定。

本方法硫酸軟骨素的檢出限為100ng。

1．方法提要

樣品中的硫酸軟骨素用乙腈分散均勻，以水溶解，經反相離子對液相色譜分離后，在波長195nm測定，用外標法定量。

2．儀器

(1)高效液相色譜儀：配有紫外檢測器。(2)超聲波清洗器。

3．試劑

除非另有說明，所有試劑均為分析純。(1)水：GB／T6682規定的一級水。(2)乙腈：色譜純。(3)戊烷磺酸鈉溶液：稱取0．879戊烷磺酸鈉，用500ml水溶解，該溶液的濃度為10mmol／L。(4)硫酸軟骨素標準品：美國Sigma公司，純度99％。(5)硫酸軟骨素標準溶液：準確稱取硫酸軟骨素標準品10mg，置于10ml容量瓶中，先加入1ml乙腈，使其分散均勻，再加入超純水至刻度線，用超聲波超聲使其充分溶解，即得到1．00mg／ml的標準貯備液。分別精密吸取對照品溶液0．1ml、0．2ml、0．5ml、1．0ml、2．0ml置10ml容量瓶中，用10％乙腈水溶液稀釋至刻度，得到濃度為10μg／ml、20μg／ml、50μg／ml、100μg／ml、200μg／ml的標準系列溶液。

4．分析步驟

(1)樣品處理：稱取適量樣品(相當于硫酸軟骨素0．5mg)，精密至0．001g，置于10ml容量瓶中，加1．0ml乙腈，使其分散均勻，再用超純水定容至10ml，超聲20min，靜置，經0．45μm濾膜過濾后作為供試品液。

(2)色譜條件

色譜柱：c18柱，150mm×4．6mm，5μm。

流動相：乙腈+戊烷磺酸鈉溶液(10+90，V／V)。

流速：0．8ml／min。

檢測波長：195nm。

進樣量：10μl。柱溫：室溫。

(4)色譜測定：分別將10μl不同質量濃度的硫酸軟骨素系列標準溶液及制備后的樣品溶液注入液相色譜儀中，以保留時間定性，以硫酸軟骨素質量濃度與相對應的峰面積繪制工作曲線，獲得線性回歸方程及相關系數，以此計算樣品進樣溶液中硫酸軟骨素的濃度。

(5)色譜圖：標準溶液及試樣溶液的色譜圖見圖3—22，硫酸軟骨素的保留時間約為2．15min。試樣溶液色譜圖中，硫酸軟骨素色譜峰右側為氨基葡萄糖(為保健食品中另一種功效組分)的色譜峰，其保留時間為2．46min，不影響硫酸軟骨素的定量。

標準溶液及試樣溶液的色譜圖

5．結果計算

試樣中硫酸軟骨素的含量按下式進行計算。

X=(c×V)/(m×1000)

式中X——試樣中硫酸軟骨素含量(mg／g)；

c——由標準曲線計算得到的樣品待測液中硫酸軟骨素的濃度(μg／ml)；

V——樣品提取時的稀釋體積(ml)；

m——樣品的質量(g)；

1000——由μg／g換算為mg／g的換算系數。

6．注釋

硫酸軟骨素(chondroitin sulfate)是以D一葡萄糖醛酸和2一乙酰氨基一2一脫氧一硫酸一D一半乳糖通過β一1，3糖苷鍵相結合的雙糖為基本單位，聚合而成的一類大分子多糖，由動物軟骨組織中提取而來。硫酸軟骨素在心血管疾病、關節病的防治等方面具有重要的作用。

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